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Plateforme de cristallisation PDF Imprimer Envoyer

 

Structure cristalline de l'octamère de la tyrosine kinase capAB (S. Nessler)La plate-forme est hébergée et animée par le Laboratoire d'Enzymologie et de Biochimie Structurales et a été labellisée IBISA en 2009. Elle fait partie du Pôle de Biologie Structurale et Protéomique d'IMAGIF. Elle bénéficie d'un environnement scientifique de qualité au sein du LEBS et du Centre de Recherche de Gif, et travaille en relation directe avec les plates-formes de clonage et de biophysique du LEBS/IMAGIF.

Créée en 2006, elle permet de réaliser le criblage, l’analyse et l’optimisation automatisés des conditions de cristallisation des macromolécules. Elle offre notamment l'accès en libre service aux robots de cristallisation et visualisation des cristaux, met à disposition de ses utilisateurs des kits de cristallisation prêts à l’emploi, et peut réaliser des projets de cristallisation et cristallographie en collaboration. La plateforme anime des réunions avec ses utilisateurs, qui permettent d’identifier les nouvelles approches à développer, par exemple pour la qualification des échantillons ou l’automatisation des procédures d’optimisation. Elle accueille et organise des formations en cristallisation.

La proximité du synchrotron Soleil est en outre un atout considérable pour la cristallographie des protéines au LEBS. Le synchrotron est d'une part indispensable à la caractérisation de nouveaux cristaux (cristaux de sels ou de macromolécules ? Quels en sont la maille et le groupe d'espace ? Ai-je des bonnes conditions de tampons pour la congélation des cristaux?) et d'autre part à la collecte de jeux de données complets pour la résolution de structures par remplacement moléculaire ou par utilisation de dérivés lourds.

 

Equipements

Outre des avantages de rapidité, reproductibilité et multiplicité des essais possibles, les robots ne nécessitent que de faibles quantités de protéines.

- robot de cristallisation Tecan : remplissage des boites 96 puits avec plus de 800  conditions de cristallisation (commerciales ou "maison"). Possibilité de réaliser des gouttes de cristallisation de microvolume.

- robot de cristallisation Cartesian : préparation de gouttes de cristallisation de nanovolume (transfert de volumes entre 50 et 200 nl), consommation de protéine réduite (13 µl de protéine pour 96 gouttes à une seule concentration), 3 concentrations différentes de protéine ou 3 différents ligands par condition de cristallisation.

Possibilité d'optimisation des cristaux sur les deux robots.

- robot de visualisation Tritek-Crystal Pro : il assure le suivi de la croissance cristalline : capture automatisée d’images de haute qualité (luminosité et focus variables), stockage de plaques

variées (identification par code barre qui assure la confidentialité), prise d’images automatique et programmable des gouttes de cristallisation, visualisation à distance des images et attribution des scores via une interface sécurisée.

 

Offres proposées

Criblage et optimisation des conditions de cristallisation en libre-service

- Formation à l’utilisation des robots et validation d’autonomie, conseils sur le choix des kits et les stratégies d’optimisation.

- Réalisation des expériences de cristallisation par l’utilisateur, visualisation à distance des cristaux via un compte utilisateur.

En option : Préparation des plaques d’optimisation en 96 puits.

 

Cristallisation et analyse structurale en collaboration

Réalisé par le personnel de plate-forme et/ou le personnel du laboratoire, qui est co-auteur des publications issues de ces travaux.

Qualification de l’échantillon (DLS, CD, gel SDS-PAGE…), criblage des conditions de cristallisation, optimisation des cristaux, congélation des cristaux, enregistrement des données de diffraction aux rayons X en synchrotron, traitement des données de diffraction, résolution de la structure 3D.

Kits disponibles (Nextal, Jena, Hampton Research, MDL) : Classics, MBClass, MBClass II, PEG, PEG II, MPD, JCSG+, AmSO4, Stura-Macrosol, Precipitant Synergy, Protein Complex, Additive screen, Detergent screen.

 

Contact :

Armelle Vigouroux : Tél : 01 69 82 34 72 - Cette adresse email est protégée contre les robots des spammeurs, vous devez activer Javascript pour la voir.

Fichiers à télécharger :

- Fiche projet
- Fiche échantilllon de cristallisation

Tarifs :

IMAGIF

 

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